博物馆导游泰德(威尔?法瑞尔 配音)是个爱岗敬业的好青年，其博学热忱的讲解博得了带学生来此参观的漂亮女教师麦琪的好感。老馆长布鲁斯百利先生告诉了泰德一个不幸的消息：由于参观的人数太少，博物馆面临着关张的窘境，唯一的拯救办法就是推出一项其他博物馆前所未见的新奇展品，老馆长出示给泰德一本带有地图的神秘日记，其中指明了非洲扎格瓦部落迷失的一处圣陵所在，只要从中带回一尊大型神像，博物馆就有救了。黄衣黄帽的泰德一身的狩猎装扮，用具准备妥当后，他乘着轮船向非洲出发了。可是，急迫上路的泰德未曾料想，老馆长的儿子小布鲁斯百利事先撕去了日记中指明神像方位的重要一页，后者一直盘算着把博物馆变成停车场，自然希望泰德的此行落空。
到了非洲丛林的泰德一片茫然，一只顽皮的小猴在远处打量着这位戴着黄帽子的不速之客，显然这只小猴子对泰德发生了兴趣，尾随着泰德前行。泰德找到了地图所示的古老神像，只是神像太小了，完全不像老馆长描述的那样宏伟，沮丧的泰德拍了一张照片发给了老馆长。欣喜若狂的老馆长没有留心神像的比例大小，回信确认说正是这尊神像。在泰德心情沮丧时，顽皮的小猴子贴心地陪在他的左右，寂寥的人猴之间由此产生了一段难舍的友谊，在泰德动身离开非洲时，小猴子也悄悄跟上了船。
与此同时，老馆长正欢天喜地为宝贵神像的揭幕仪式忙着准备。回到了大都市的泰德惊讶地发现小猴子居然跟着自己来到了住宿的公寓，公寓严格规定不许宠物进入，顽皮的小猴惹恼了势利的房东太太，泰德也被撵了出来。落魄的泰德随后被叵测的小布鲁斯百利推到了新闻发布会的现场，正当泰德想要说出神像的真相时，小猴子把馆内的恐龙展品弄得一塌糊涂，在儿子的挑拨下，不明就里的老馆长一怒之下解雇了无辜的泰德。
无家可归、继而失业，看着天真的小猴，怒火中烧的泰德很快就消气了，同病相怜的他给小猴起名为乔治。在发明家好友科洛维斯的帮助下，泰德弄来了投影仪用以放大神像的影像，从而暂时挽救了博物馆即将被转让的命运。可是，贼心不死的小布鲁斯百利暗中破坏了投影仪，并嫁祸于乔治。
乔治不断惹来麻烦，最终引来了动物管理署的官员，把乔治带走并装上了货船，准备运回非洲。善良的麦琪提醒泰德说他不应该错过这个陪伴他面对人生低谷的朋友，恍然大悟的泰德冲上货船救下了乔治。与老朋友再度重逢，兴高采烈的乔治对泰德指明小神像正是帮助他们找到大神像的关键所在。再度走入非洲的泰德终于找到了真正的大神像，博物馆由此成为了城中的观光热点，泰德与麦琪相爱了，布鲁斯百利父子也和好如初，顽皮的乔治做了一件大好事。
